D/F12培养基
D/F12培养基低于1.7,考虑RNA降解,*常见的原因是RNA酶去除不彻底。
建议你1.EP管和tip用DEPC水泡,如果来不及也可以买现成的。
2.提取时注意低温,防止RNA降解。
3.洗涤用的75%酒精用DEPC水配制,*后融解RNA的水也应是DEPC水,或去RNA酶水。
4.提取的RNA尽快转录成cDNA,-70度保存时间不宜过长(一般不超过一个月)。
D/F12培养基提RNA提取秘诀:
1.提取RNA过程应该尽量快,不要太过仔细,以减少RNA的降解
2.在吸取上清液时要小心,离心管尽量不要抖动和倾斜,保持其从离心机里拿出来的角度吸取,加入异丙醇的那一步要尤其小心,上清液不要贪多
3.D/F12培养基干燥时不要太过
4.你跑的电泳是不是普通的琼脂糖凝胶电泳?这个结果不是很准确,因为在跑胶的过程当中RNA也会降解,但并不一定你提取的RNA效果不好,一般情况下跑出来的电泳结果有3条带,2000bp,1000bp,100多的位置各有一条带,分别是28s,18s,5s,如果5S很亮,表示RNA降解
5.提完的RNA可以做反转录,D/F12培养基然后用管家基因检测,只要能扩出明亮的条带即对你的实验没有影响。注意:在用管家基因检测时应增加循环XY130823 多点突变试剂盒 20次 XY100213 DNA嵌套缺失试剂盒 10次 XY100922 亚硫酸氢盐DNA修饰试剂盒 50次 XY130301 DNA甲基化修饰试剂盒 150次 XY130428 甲基化PCR 2.0试剂盒 150次 XY100923 甲基化专一性PCR试剂盒 50次 XY100936 人甲基化/非甲基化DNA标准品 100次 XY111009 端粒酶重复片段扩增试剂盒 50次 XY100204 一站式PCR-SSCP套装 1套 XY101003 RAPD PCR试剂盒(含银染) 100次 XY111109 DOP-PCR试剂盒 50次 XY130408 eTS抑制性差减杂交PCR试剂盒 10次 数,以检测是否有DNA污染。