柱式DNAback使用说明书

产品及特点

本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA反应体系中(如PCR反应)回收DNA片段。试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅胶膜和独特的溶胶体系，可以从琼脂糖凝胶中或DNA反应体系中高效快速回收DNA片段，回收效率可达50-90%（跟片段大小相关）。本产品的特点如下:

1. 高效，回收效率*高可达90%（跟片段大小和胶浓度等因素有关），可以跟国外有名厂家的产品媲美。

2. 快速，整个过程只需要十余分钟。洗脱液不需要额外加乙醇。

3. 两用，既可用于胶回收，也可以用于PCR或其他酶反应回收。

4. 范围广，回收DNA的长度范围为50 bp-40 Kb（但效率各不相同）。

5. 能回收单链、双链及环状DNA，*大吸附量为10ug。

6. 回收的DNA可直接用于酶切、连接、PCR、测序等多种分子生物学实验。

7. 本试剂盒足够纯化50片含DNA的琼脂糖凝胶条（每片胶条重量不超过250mg），可以纯化50次酶反应（包括PCR反应，每次体积不超过250uL）。

规格及成分

运输及保存

常温运输及保存，有效期为一年。由于通用溶胶液2.0是高盐溶液，因此在低温时容易产生沉淀。如果产生沉淀，需要60℃加热溶解后才可以使用。

自备试剂

异丙醇

使用方法

一：对胶回收：

1. 用干净的刀片切取含DNA片段的琼脂糖凝胶（100 mg左右，尽可能多地把多余的胶切除，否则会影响回收效率），放入一干净的1.5 mL塑料离心管（自备）中称重，按重量比为1：2的比例加入通用溶胶液2.0 (0.1 g的琼脂糖凝胶需要加入0.2mL的通用溶胶液2.0)。如果琼脂糖凝胶的浓度大于2%，则需要按1：3的比例加入通用溶胶液2.0溶解胶块。

2. 50℃保温10分钟使胶完全溶化，每隔2-3分钟振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。如果片段长度在300bp以下，建议不要50℃保温，而是延长溶胶时间，以免DNA变性，影响回收率。

3. 在等待期间，活化离心吸附柱。在离心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液，套上收集管后室温放置2分钟，然后12,000 rpm离心2分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须在当天使用。

4. 在上柱前，在溶化的胶中加入相当于胶块体积1/2的异丙醇（对100mg胶块，加50uL），快速振荡10秒混匀。

5. 将溶液转移到离心吸附柱中，套上收集管，静置3分钟。注意：静置有助于DNA与离心吸附柱的硅胶膜结合。本产品提供的离心吸附柱的*大上样体积为0.8mL，若溶胶液的总体积大于0.8mL，一次加不完，可以分多次将溶液加入到吸附柱中。

6. 12000-15000 g离心1分钟，倒掉收集管中的穿透液。

7. 加入0.7mL通用洗柱液于离心柱中，12000-15000 g离心1分钟，倒弃收集管中的废液。如果回收的DNA用于盐敏感实验（如平末端连接或直接测序）,建议加入通用洗柱液后静置2-5分钟再离心。

8. 12000-15000 g离心半分钟以去除离心柱中的残留液体。

9. 将离心柱吸附置于一新的干净的塑料离心管（自备）中，悬空加入50 uL DNA洗脱液于离心吸附柱硅胶膜的中央。注意：如果回收的DNA用于测序，则可用重蒸水（自备）洗脱DNA。DNA洗脱液可以也用TE替代，但用水或TE替代DNA洗脱液3.0时，回收率可能稍有降低。

10. 静置3分钟后12000-15000 g离心1分钟。

11. 离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液，可立即用于后续实验或者放-20℃长期保存。如果将所得DNA溶液再次加回到离心吸附柱中，重复洗脱过程，将得到更多的DNA。

12. 用电泳方法或测OD方法确定回收所得DNA的浓度，1 OD260对应的浓度是50ug/mL（对双链DNA）或40ug/mL（对单链DNA），纯净DNA的OD260/OD280比值应该在1.8左右。注意：OD读数跟pH相关，如果用自备的重蒸水洗脱，OD值会低于在DNA洗脱液3.0中测定的数字。

二：PCR或其他酶反应回收

13. 直接在PCR或其他酶反应管中加2倍体积的通用溶胶液2.0，振荡10秒混匀。如果PCR反应中使用了石蜡，需要预先去除。

14. 活化离心吸附柱。在离心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液，套上收集管后室温放置2分钟，然后12,000 rpm离心2分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须在当天使用。

15. 在上柱前，在反应液和溶胶液的混合液中加入相当于反应体积1/2的异丙醇（对100uL的反应液，加50uL），快速振荡10秒混匀。

16. 直接进入上面胶回收操作的第5步并进行后面的操作。

注意事项

1. 电泳回收DNA时，电泳缓冲液可以用TAE、TBE或者本公司的超快电泳液。回收效果为SuperBuffer-2*好，TAE次之，TBE*差。

2. 通用洗柱液含有容易挥发物质，使用后一定要拧紧瓶盖，密闭保存。

3. 琼脂糖凝胶体积的大小与回收率成反比关系，即体积越大，越不利于回收，一次胶回收以使用100 mg琼脂糖凝胶为宜。

4. 如果在5-10分钟内凝胶溶化不完全，可以适当的延长水浴时间以使胶充分溶化，否则DNA包裹在琼脂糖凝胶中，影响DNA的回收效率。

5. 胶溶化后的液体转移到离心柱后，可以延长静置时间使DNA与膜充分结合，提高回收效率。

6. 洗脱DNA前的空甩很重要，其目的是去除膜上残留酒精，否则残留酒精会影响后续DNA反应。

7. 增大DNA洗脱液使用量有利于回收，但要注意实际上样量与*终回收体积的关系，以便于计算回收率。DNA洗脱液可以用TE或水替代，但回收率稍有降低。

疑难解答

Q：为何用硅胶膜吸附柱法回收TBE胶中的DNA效果不好？

A：因为TBE中的硼酸会跟硅胶表面的OH基团反应，而这些OH又是吸附

DNA所必需的。

关联产品

一管式胶回收试剂(CAT#:60706)、天恩泽超级电泳液(CAT#:151103)、绿如蓝低毒核酸染料(CAT#:70303)