柱式病毒DNAout使用说明书

产品及特点

本产品是在天泽基因一管式病毒DNAOUT的基础上开发的、专门用于从血清(血浆)等液体样品及拭子（咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、**拭子等）中提取微量病毒DNA的产品，它具有下列特点：

1. 操作简单，整个过程只需要20分钟左右，不需要额外在洗柱液中补加乙醇。

2. 灵敏度高，通过PCR检测到的*终灵敏度可以达到30-50拷贝/mL。

3. **无毒，不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。

4. 如果加上病毒离心富集步骤，*多可以处理1.5 mL液体病毒样品。

5. 与PCR和荧光PCR兼容。

6. 价廉物美，性价比远高于国外同类产品。

7. 适用于各种材料，包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。

规格及成分

运输及保存

常温运输及保存，有效期一年。

自备试剂

无，但需要自备RNase-free 的1.5 mL离心管（耗材）。

使用方法

1. 对于液体病毒样品：在1.5 mL离心管中加入0.1-0.2 mL液体病毒样品。如果病毒需要富集，可以将1.5 mL液体在4℃ 24,000 g冷冻离心60分钟，移弃1.3 mL后剩下的0.2 mL用于第2步处理。

对于拭子样品：将一个拭子放入离心管中，加入1mL自备的生理盐水，振荡器上充分振荡半分钟，然后转移0.2 mL到1.5 mL塑料离心管中，用于第2步处理。

2. 加入0.6 mL溶液A到**步得到的0.2 mL样品中，振荡30秒混匀后室温放置10分钟。注意：溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。

3. 短暂离心后将500 uL溶液转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。

4. 12,000 rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。

5. 将剩余溶液短暂离心后全部转移到步骤3的离心吸附柱中，室温放置2分钟。

6. 12,000 rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。

7. 加入0.7 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rmp室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。

8. 12,000 rpm室温离心1分钟（干甩），弃含穿透液的离心管。

9. 将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的RNase-free 的1.5 mL离心管中，在离心吸附柱的滤膜的中部加入30-100 uL DNA洗脱液3.0，然后室温放置2分钟。

10. 12,000 rpm室温离心1分钟，离心管中的溶液即为病毒DNA溶液。

11. DNA样品可以直接用于PCR，也可放-20℃长期保存。

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疑难解答

Q：提取液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难？

A：原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存，每个病毒*多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种RNA分子，每种RNA有很多拷贝)，同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一)，样品中病毒数往往又不是很多，使得样品中病毒核酸的**量往往比一个细胞中核酸的**量还少，所以操作中十分容易丢失。另外，由于得到的核酸**量很少，不能使用电泳和测OD检测，只能通过PCR或RT-PCR检测，而PCR或RT-PCR的条件又需要优化，所以要确定提取是否成功十分不容易。

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