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如何用ELISA评价抗血清的效价

如何用ELISA评价抗血清的效价

ELISA一般用来定性,如果定量就很麻烦。比如你所提到的问题。
对照血清可形成梯度,是因为对照血清与包板的抗原量在所检测的范围内呈线性;待检血清不呈线性,*有可能就是该血清与包板的抗原量不匹配。
用ELISA定量,首先应该做一下方阵ELISA,用不同的抗原量包板,以不同的抗体量稀释,先找到合适的抗原量,即在此抗原量下,抗体随着不同的稀释度,其OD是呈线性下降的。如果想用对照血清,应以同样的方法找到适合对照血清的包板抗原量。如果两者的抗原量能匹配就*好了,如果不匹配就找到*相近的抗原量包板。这些准备工作做好了才应该开始你现在的工作。

做间接法测抗体的过程中,包被了抗原后,后面加等量的一抗和二抗,加100ul和200ul有差异吗,我的理解:加200ul一抗肯定比加100ul一抗和抗原结合的多,那这样加等量的二抗后,结合的二抗也多,也就是酶也多,那这样催化底物不就多了吗,按照阳性/阴性大于2.1的算法,加200ul一抗的结果应该比100ul的OD值大啊,是这样吗?