QuickMutation™基因定点突变试剂盒
产品编号
产品名称
产品包装
产品价格
XY2206
10次
307.00元
QuickMutation™基因定点突变试剂盒(QuickMutation™ Site-Directed Mutagenesis Kit)可以快速完成质粒DNA的点突变(point mutation)，多个邻近密码子的突变，单个或多个邻近密码子的缺失(deletion)或插入(insertion)突变。 基因定点突变常用于研究基因的转录调控、RNA或蛋白质的结构和功能，以及用于质粒中部分序列的微调等。 本试剂盒利用了目前*常用的基因点突变技术，只需通过基于PCR的突变质粒的生成，和基于DpnI的模板质粒的消化，转化培养以及后续的酶切或测序鉴定，即可得到预期的突变质粒 (参考图1)。DpnI消化仅需5分钟，累计操作时间不足2小时即可完成 基因的定点突变。
图1.基因定点突变试剂盒原理图
本试剂盒使用了*新的保真性更强，灵敏度更高，扩增速度可达2kb/min，扩增长度可达12kb的BeyoFusion™ DNA Polymerase，从而大大缩短了突变反应所需的时间，进一步提高了基因定点突变的成功率。同时进一步严格验证了试剂盒中的DpnI，确保能在5分钟内充分消化掉甲基化的模板质粒，同时不会消化未甲基化的PCR产物。 参考图1，使用本试剂盒时需要先设计长度通常为25-45个碱基互补的两个引物，在引物中含有预期的突变位点。然后以待突变的质粒为模板，用这两个引物进行PCR扩增反应。这样可以产生含有预期的突变位点的双链质粒，但这个双链质粒中有两个nick位点。待突变的质粒通常来源于DH5α等dam+大肠杆菌，在这些dam+**中质粒会被甲基化修饰，而在体外通过PCR扩增得到的质粒不会被甲基化。这样用特异性识别甲基化位点的酶DpnI处理，可以消化掉待突变的质粒模板，而使通过PCR扩增出来的含有突变位点的质粒被选择性地保留下来。随后把DpnI处理过的产物转化感受态**后，突变质粒中的两个nick位点可以被大肠杆菌修复，得到的克隆就会含有预期的突变质粒了。 本试剂盒提供了DH5α甘油菌，可用于感受态**的制备。 本试剂盒分别使用6kb和12kb的质粒进行了点突变测试，实测突变率接近100%(参考图2)。实际进行点突变时，可能会因为突变引物的设计、模板使用量、感受态效率等因素出现不同的突变率。
图2. 本试剂盒实际使用效果图。A. 使用本试剂盒进行点突变获得的LB平板照片。以一个6kb质粒为模板，使用本试剂盒进行PCR扩增以实现点突变，DpnI 37℃消化5min，取10μl产物转化100μl DH5α感受态，涂板后37℃培养过夜所获得的LB平板照片。B. 阴性对照LB平板照片。与A相比没有添加BeyoFusion™ DNA Polymerase，这样模板质粒完全被DpnI酶所消化，没有任何的假阳性克隆产生。C. 突变前后的测序图。突变前的测序结果(WT, wild type)和从图A中挑取9个克隆的测序结果(Mu, mutant)。箭头所示为拟突变的位点，红色下划线的为突变前和突变后的碱基。本次实验的突变率达到了100%。
本试剂盒共可以进行十次基因定点突变反应。 包装清单：
包装
XY2206-1
BeyoFusion™ DNA Polymerase
10μl
XY2206-2
10X BeyoFusion™ Buffer (with Mg2+)
100μl
XY2206-3
dNTP Mix (2.5mM each)
50μl
XY2206-4
DpnI
XY2206-5
DH5α甘油菌
200μl
XY2206-6
Nuclease-Free Water
1ml
—
说明书
1份
保存条件： -20℃保存，一年有效。 注意事项： 需自行配制LB液体培养基和LB平板以用于**的培养。 需自行设计和合成用于基因定点突变的引物。需自备用于**转化的试剂。 使用本试剂盒前请先阅读后面的常见问题。 本产品**于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或**，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 为了您的**和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。