pCANTAB-5E(非空载)

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质粒简介
质粒图谱
质粒序列

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产品货号	产品名称	产品规格	优惠价
XY1099	pCANTAB-5E(非空载)	20μl	¥请加QQ询价

使用说明

信裕质粒平台的各批次质粒菌株发货前均经过严格的多重验证，如存在质量问题，请在收到产品的三个月内通知我司。收到质粒后请短暂离心，加入20μl ddH2O溶解质粒，取2μl转化至对应感受态中，挑取单克隆重新提取质粒后使用。如需获取其他详细信息请登录我司官网查询。

基本信息

启动子:	Lac/lac promoter
质粒大小:	5216bp
质粒标签:	N-g3 signal，C-E tag
原核抗性:	氨苄青霉素Amp
克隆菌株:	大肠杆菌Stbl3
培养条件:	37℃，有氧，LB

质粒简介

本系统是用于抗体基因表达，制备重组抗体。宿主菌 TG1 为质粒载体pCANTAB5e 复制和表达的宿主菌，无抗性，用 2×YT 培养基，37℃进行培养。载体 pCANTAB5e 为用于构建重组单链抗体 scFv 的载体，具有氨苄抗性，大小为4522bp，具体图谱及酶切位点如下示。辅助噬菌体 M13K07 用于拯救噬菌粒，具有卡那抗性，在其辅助下噬菌粒得以复制，并以融合的形式表达在噬菌体表面。在 scFv 基因后面含有一段编码 Tag 尾肽（E-Tag）的序列，在尾肽后面有一琥珀（Amber）终止密码子，位于 scFv 基因与 cpIII 基因之间，在抑制型** TG1 中，这种琥珀密码子只有 20％有效，故在蛋白翻译过程中可以通读而形成 scFv-cpIII融合蛋白；但在非抑制型菌株中，如 HB2151，此终止子被识别，同时 scFv 基因在翻译过程中在 cpIII 基因前终止，形成独立的抗体蛋白，滞留于细胞膜间隙，并在长时间培养后泄漏在培养液中，形成可溶性表达。
【操作方法】本方法来源于网络，本平台未做实验证实，仅供参考。
1. 辅助噬菌体毒种制备
1) 将辅助噬菌体 M13K07 划线于 2×YT 琼脂平板上；
2) 制备 2×YT 半固体琼脂（0.7％琼脂）为上层琼脂（Top Agar），冷却至 50 ℃时，取 4 mL Top Agar 并加入 0.5 mL 过夜培养的新鲜 TG1 菌（OD660 达 0.8），充分混匀，沿着划线浓度从低至高的方向，倾注 Top Agar；
3) 37℃培养 6-12 小时，用接种针挑取单个噬菌斑，接种于 30-200 mL 2×YT-K（kanamycin 70 μg/mL），37℃充分振荡培养 10-14 小时；
4) 8000 rpm 离心 15 min，4 ℃；
5) 小心取上清，建议用 0.45μm 滤膜过滤后，分装无菌小管，存放 4℃至少可用半年。
2．噬菌体毒种的滴定
1) 准备不含任何***的 2×YT 培养平板 5-6 个；
2) 用 2×YT 培养基配制 0.7%琼脂平板，即为表层琼脂（Top Agar），冷却至 42℃并在 42℃恒温保存；
3) 将上述噬菌体溶液用培养基做 10-6、10-7、10-8、10-9、10-10 稀释；
4) 取过夜培养的 TG1 菌液（OD660=1 左右），分装小试管，500μL /小试管，标明10-6 至 10-10 稀释度；
备注：宿主菌的制备请参照 TG1 菌株说明书进行。
5) 加入以上步骤 3 中依次稀释的噬菌体 100μL 到每个相应的标准稀释度的试管中，充分混匀，37℃轻柔振荡反应 30 min；
6) 加入 Top Agar 3 mL 至每个试管中，立即浇注事先准备好的平皿，37℃培养过夜；
7) 计算平皿上的空斑数，乘于相应稀释倍数，一般浓度可达 1012pfu/mL。
【注意事项】
1．噬菌体毒种，在使用前应按以上推荐的方法进行浓度滴定；
2．噬菌体毒种存放在 4℃下即可，不可-20℃或更低温度冻存；

质粒图谱

质粒序列

LOCUS Exported 5216 bp ds-DNA circular SYN 27-OCT-2017

DEFINITION synthetic circular DNA

KEYWORDS pCANTAB-5E(非空载)

SOURCE synthetic DNA construct

ORGANISM synthetic DNA construct

REFERENCE 1 (bases 1 to 5216)

AUTHORS .

TITLE Direct Submission

http://www.miaolingbio.com

FEATURES Location/Qualifiers

source 1..5216

/organism="synthetic DNA construct"

/mol_type="other DNA"

promoter 96..200

/gene="bla"

/label=AmpR promoter

CDS 201..1061

/codon_start=1

/gene="bla"

/product="beta-lactamase"

/label=AmpR

/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

related antibiotics"

/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

LIKHW"

rep_origin 1232..1820

/direction=RIGHT

/label=ori

/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of

replication"

promoter 2144..2174

/label=lac promoter

/note="promoter for the E. coli lac operon"

protein_bind 2182..2198

/label=lac operator

/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"

/note="The lac repressor binds to the lac operator to

inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be

relieved by adding lactose or

isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."

misc_feature 2218..2315

/label=g3 signal

misc_feature 2329..3066

/label=Stuffer(非空载）

misc_feature 3075..3120

/label=E tag

CDS 3520..4338

/codon_start=1

/label=fd gene 3

/translation="MFQNNRFRNRQGALTVYTGTVTQGTDPVKTYYQYTPVSSKAMYDA

YWNGKFRDCAFHSGFNEDPFVCEYQGQSSDLPQPPVNAGGGSGGGSGGGSEGGGSEGGG

SEGGGSEGGGSGGGSGSGDFDYEKMANANKGAMTENADENALQSDAKGKLDSVATDYGA

AIDGFIGDVSGLANGNGATGDFAGSNSQMAQVGDGDNSPLMNNFRQYLPSLPQSVECRP

YVFGAGKPYEFSIDCDKINLFRGVFAFLLYVATFMYVFSTFANILRNKES"

rep_origin complement(4560..5015)

/direction=LEFT

/label=f1 ori

/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow

indicates direction of (+) strand synthesis"

ORIGIN

1 gacgaaaggg cctcgtgata cgcctatttt tataggttaa tgtcatgata ataatggttt

61 cttagacgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt

121 tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat

181 aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt

241 ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg

301 ctgaagatca gttgggtgct cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga

361 tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc

421 tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac

481 actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg

541 gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca

601 acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg

661 gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg

721 acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg

781 gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag

841 ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg

901 gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct

961 cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac

1021 agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta actgtcagac caagtttact

1081 catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga

1141 tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt

1201 cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct

1261 gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc

1321 taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgttc

1381 ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc

1441 tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg

1501 ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt

1561 cgtgcataca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg

1621 agcattgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg

1681 gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt

1741 atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag

1801 gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt

1861 gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta

1921 ttaccgcctt tgagtgagct gataccgctc gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt

1981 cagtgagcga ggaagcggaa gagcgcccaa tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc

2041 cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg gaaagcgggc agtgagcgca

2101 acgcaattaa tgtgagttag ctcactcatt aggcacccca ggctttacac tttatgcttc

2161 cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagctatg

2221 accatgatta cgccaagctt tggagccttt tttttggaga ttttcaacgt gaaaaaatta

2281 ttattcgcaa ttcctttagt tgttcctttc tatgcggccc agccggccat ggcccaggtg

2341 aagctgcagc agtcaggacc tggcctggtg gcgccctcac agagcctgtc catcacatgc

2401 accgtctcag ggttttcatt aaccagctat ggtgtacact gggttcgcca gcctccagga

2461 aagggtctgg agtggctggg agtaatatgg gctggtggaa gcacaaacta taattcagct

2521 ctcaaatcca gactgaacat cagcaaggac aactccaaga gccaagtttt cttaaaaatg

2581 aacagtctcc aaactgatga cacagccatg tactactgtg ccagaaactg gggcagctac

2641 tggtacttcg atgtctgggg ccaaggccac ggtcaccgtc tcctcagtgg aggcggttca

2701 ggcggaggtg gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgg acattgagct cacccagtct

2761 ccagcaatca tgtctgcatc tccaggggaa aaggtcacca tgacctgcag ggccagctca

2821 agtataagtt ccagttactt gcactggtac cagcagaagt caggcgcttc ccccaaaccc

2881 ttgattcata ggacatccaa cctggcttct ggagtcccag ctcgcttcag tggcagtggg

2941 tctgggacct cttactctct cacaatcagc agcgtggagg ctgaagatga tgcaacttat

3001 tactgccagc agtggagtgg ttacccattc acgttcggtg ctgggaccaa gctcgagatc

3061 aaacgggcgg ccgcaggtgc gccggtgccg tatccggatc cgctggaacc gcgtgccgca

3121 tagactgttg aaagttgttt agcaaaacct catacagaaa attcatttac taacgtctgg

3181 aaagacgaca aaactttaga tcgttacgct aactatgagg gctgtctgtg gaatgctaca

3241 ggcgttgtgg tttgtactgg tgacgaaact cagtgttacg gtacatgggt tcctattggg

3301 cttgctatcc ctgaaaatga gggtggtggc tctgagggtg gcggttctga gggtggcggt

3361 tctgagggtg gcggtactaa acctcctgag tacggtgata cacctattcc gggctatact

3421 tatatcaacc ctctcgacgg cacttatccg cctggtactg agcaaaaccc cgctaatcct

3481 aatccttctc ttgaggagtc tcagcctctt aatactttca tgtttcagaa taataggttc

3541 cgaaataggc agggtgcatt aactgtttat acgggcactg ttactcaagg cactgacccc

3601 gttaaaactt attaccagta cactcctgta tcatcaaaag ccatgtatga cgcttactgg

3661 aacggtaaat tcagagactg cgctttccat tctggcttta atgaggatcc attcgtttgt

3721 gaatatcaag gccaatcgtc tgacctgcct caacctcctg tcaatgctgg cggcggctct

3781 ggtggtggtt ctggtggcgg ctctgagggt ggcggctctg agggtggcgg ttctgagggt

3841 ggcggctctg agggtggcgg ttccggtggc ggctccggtt ccggtgattt tgattatgaa

3901 aaaatggcaa acgctaataa gggggctatg accgaaaatg ccgatgaaaa cgcgctacag

3961 tctgacgcta aaggcaaact tgattctgtc gctactgatt acggtgctgc tatcgatggt

4021 ttcattggtg acgtttccgg ccttgctaat ggtaatggtg ctactggtga ttttgctggc

4081 tctaattccc aaatggctca agtcggtgac ggtgataatt cacctttaat gaataatttc

4141 cgtcaatatt taccttcttt gcctcagtcg gttgaatgtc gcccttatgt ctttggcgct

4201 ggtaaaccat atgaattttc tattgattgt gacaaaataa acttattccg tggtgtcttt

4261 gcgtttcttt tatatgttgc cacctttatg tatgtatttt cgacgtttgc taacatactg

4321 cgtaataagg agtcttaata agaattcact ggccgtcgtt ttacaacgtc gtgactggga

4381 aaaccctggc gttacccaac ttaatcgcct tgcagcacat ccccctttcg ccagctggcg

4441 taatagcgaa gaggcccgca ccgatcgccc ttcccaacag ttgcgcagcc tgaatggcga

4501 atggcgcctg atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc ggtatttcac accgcatata

4561 aattgtaaac gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat ttttgttaaa tcagctcatt

4621 ttttaaccaa taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa tcaaaagaat agcccgagat

4681 agggttgagt gttgttccag tttggaacaa gagtccacta ttaaagaacg tggactccaa

4741 cgtcaaaggg cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca ctacgtgaac catcacccaa

4801 atcaagtttt ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat cggaacccta aagggagccc

4861 ccgatttaga gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg agaaaggaag ggaagaaagc

4921 gaaaggagcg ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc acgctgcgcg taaccaccac

4981 acccgccgcg cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtactat ggttgctttg acgggtgcag

5041 tctcagtaca atctgctctg atgccgcata gttaagccag ccccgacacc cgccaacacc

5101 cgctgacgcg ccctgacggg cttgtctgct cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac

5161 cgtctccggg agctgcatgt gtcagaggtt ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcga