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ELISA试剂盒样本与实验的重要性
ELISA试剂盒
样本与实验的重要性
ELISA试剂盒即酶联免疫吸附法,是一种常用的固相酶免疫测定方法。 因为ELISA方法简略,便当,活络,特异性强且不需求特别设备(只需求酶标仪就可以),所以被广泛应用于各种抗原和抗体测定。
但是影响ELISA测定的要素有许多,而其操作中需求有一定的技术请求,如操作方法,环境,样本等,有时常可见到一些过错效果(即假阳性或假阴性)等,样本的重要性关系到全部实验的效果,上海极威生物为我们解读ELISA查看的影响要素之一-样本的影响
1、ELISA试剂盒样本的保存:在冰箱中保存过久的标本,在间接法ELISA测定中会致使本底过深、会构成假阳性;为避免上述问题,在测定血清标本时*佳能新鲜搜集;假如不能当即测定,根据相应的时间保存相应的温度,5 d内测定的血清标本可存放于4℃,1周后测定的血清标本应-20℃低温冻存;如冻存后融解的标本,蛋白质有些浓缩,分布不均,应充沛混合后再测定,但混匀时应轻柔,不可激烈振荡。
2、样本的时间:因为塑料试管能吸附抗原物质,所以样本长时间放在塑料管内会使样本内抗原含量下降构成假阴性。*佳的方法是运用真空采血管;并运用非抗凝标本,肝素抗凝血浆会增加OD值,EDTA、酶抑制剂(如NaN3)可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性。
3、样本受**污染:因菌体中可能会含有内源性辣根过氧化物酶,因此,被**污染的标本同溶血标本相同,可能会发作非特异性显色而搅扰测定效果。
4、ELISA试剂盒样本的凝聚:样本凝聚不全。在实验中,有的时分心急为了争取时间快速查看,在血液还未初步凝聚的时分就强行离心分别血清,致使血清中仍残留有些纤维蛋白原,在ELISA测定过程中构成肉眼可见的纤维蛋白块,易构成假阳性效果;因此血液标本搜集后有必要使其充沛凝聚后再分别血清。
5、ELISA试剂盒样本溶血:溶血标本及混有红细胞的血清选用ELISA法查看易发作假阳性。可能是溶血血清中含有过氧化酶物质(红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素),在洗刷过程中往往难以完全洗脱,它可使H2O2释放出原生态氧(O),然后催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质,即显蓝色,发作假阳性[2]。所以严峻溶血标本禁用。
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