如何制备大肠杆菌感受态细胞？
你知道如何制备大肠杆菌感受态细胞吗？今天小编就跟大家讲解下氯化钙法。
摘要
本文建立一种高效、快速的大肠杆菌感受态细胞制备的方法.方法:质粒DNA加入感受态细胞,经短暂冰浴和热休克后,直接涂布预热至37℃的平板.
原理
带有外源DNA的重组质粒，在体外构建后，导入宿主细胞，随着细胞的大量复制、繁殖，才能够有机会获得纯的重组质粒 DNA，该过程称之为转化过程。受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl 等化学试剂）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，能容许外源 DNA 的载体分子通过。
实验步骤
1. 从 37 ℃ 培养 16～20 h 的平板中挑取一个单菌落（直径 2～3 mm），转到一个含有 100 ml LB 或 SOB 培养基的 1L 烧瓶中。于 37℃ 剧烈振摇培养 3 h。一般经验，1 OD600 约含有大肠杆菌 DH5α 109 个/mL。
2. 将**转移到一个无菌、一次性使用的、用冰预冷的 50 ml 聚丙烯管中，在冰上放置 10 min，使培养物冷却至 0℃。
3. 于 4 ℃ 用 Sorvall GS3 特头（或与之相当的转头）以 4 100 r/min 离心 10 min，以回收细胞。
4. 倒出培养液，将管倒置 1 min 以使*后的痕量培养液流尽。
5. 每 50 ml 初始培养液用 30 ml 预冷的 0.1 mol/LCaCl2-MgCl2 溶液（80 mmol/L MgCl2，20 mmol/L CaCl2） 重悬每份细胞沉淀。
6. 于 4 ℃ 用 Sorvall GS3 转头（或与之相当的转头）以 4 100 r/min 离心 10 min，以回收细胞。
7. 倒出培养液，将管倒置 1 min 以使*后的痕量培养液流尽。
8. 每 50 ml 初始培养物用 2 ml 用冰预冷的 0.1 mol/L CaCl2（或 TFB） 重悬每份细胞沉淀。
9. 此时，可以用新鲜制备的感受态细胞直接做转化实验，也可以将细胞冻存于- 70 ℃。